首頁 雜志概況 投稿須知 在線投稿 在線閱讀 征訂啟事 廣告服務 行業資訊 企業動態 資料中心  專訪報道 會展信息 ENGLISH

島津中國率先推出遺傳毒性雜質NMBA(N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸)LC-MS/MS解決方案

來源: 閱讀數:23 時間:2019-10-16 15:27:53

  2019年3月1日,美國食品和藥物管理局(FDA)在官網發布血管緊張素II受體阻滯劑(ARBs)藥物氯沙坦的自愿召回公告,涉及到印度Hetero Labs Ltd.生產的87批氯沙坦鉀片,而導致該召回的主要原因是發現其中含有N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸(NMBA)雜質。由于NMBA是已知動物和潛在人類的致癌化學物質,是繼N?亞硝基二甲胺(NDMA)和N?亞硝基二乙胺(NDEA)之后上市ARBs藥物中檢測到的第三種亞硝胺類遺傳毒性雜質。此后,FDA相繼公布了Teva Pharmaceuticals和Vivimed Life Sciences Pvt Ltd等制藥公司自愿召回涉及氯沙坦鉀的63批藥品,其原因為檢出含有NMBA。同時,加拿大衛生部(HC)及英國衛生部(DHSC)也在官網上發布了氯沙坦類藥物的召回公告。直至2019年6月12日,Teva Pharmaceuticals仍在擴大自愿召回7批檢出NMBA氯沙坦鉀片,可見藥物中的遺傳毒性雜質仍受到公眾及藥品監管機構的高度關注。

  在FDA已公布的ARBs藥物亞硝胺雜質限度表中,NMBA的日允許攝入量最大值為0.96ppm。 FDA評估了暴露于9.82ppm水平NMBA相比于終生暴露于0.96ppm NMBA的服藥水平,表明6個月的暴露量不會存在患癌風險。


N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸(NMBA)
N-Nitroso-N-methyl-4-aminobutyricacid(NMBA)
CAS. 61445-55-4

  因此,為了確保患者在緩沖期可獲得氯沙坦類藥物,FDA不反對含NMBA低于9.82ppm的氯沙坦保持銷售。該過渡緩沖期FDA設為6個月,直至生產企業提供亞硝胺雜質符合要求的氯沙坦藥物來填補市場。

目前,關于氯沙坦鉀中NMBA的檢測方法尚未見公開報道,為及時應對市場檢測需求,島津中國率先推出了基于LC-MS/MS技術的檢測方法,該方法操作簡單,靈敏度高,適用性強,可有效用于氯沙坦鉀中NMBA的分析檢測。

1、 實驗部分

1.1 儀器: LCMS-8050三重四極桿質譜儀聯用儀,含有:LC-30AD×2輸液泵,DGU-20A5R在線脫氣機,SIL-30AC自動進樣器,CTO-30A柱溫箱,CBM-20A系統控制器,LCMS-8050三重四極桿質譜儀,LabSolutions(Version 5.82 SP1)色譜工作站。

1.2 分析條件:

液相色譜條件

色 譜 柱:Shim-pack XR-ODS II 2.0 mm I.D.× 100 mm L., 2.2 μm
流 動 相:A相-0.1%甲酸水溶液;B相-甲醇
流 速:0.3 mL/min柱溫:40℃
進樣體積:2 μL洗脫方式:梯度洗脫

 

質譜條件

離子化模式:ESI,正離子檢測碰撞氣:氬氣 270 kPa
霧化氣流速:3.0 L/min加熱模塊溫度:400℃
加熱氣流速:10.0 L/min干燥氣流速:10.0 L/min
接口溫度:300℃掃描模式:多反應監測(MRM)
DL溫度:250℃MRM參數:見下表

 

1.3 標準品溶液:取NMBA標準貯備液,以純甲醇逐級稀釋為0.5、1、2、5、10、20、50、100 ng/mL的八個不同濃度的混合標準工作溶液。

1.4 樣品溶液:取氯沙坦鉀三批原料藥(符合EP9.0)0.1 g于10 mL容量瓶中,加甲醇適量,超聲1 min至全部溶解,放冷至室溫,用甲醇定容待測。

2、 結果

2.1標準品色譜圖


圖1. NMBA標準品色譜圖(100 ng/mL)
(黑色-總離子流;粉色-MRM147.15/117.10;藍色-MRM147.15/87.10;棕色-MRM147.15/44.10)

2.2 線性關系及檢出定量限


圖2. NMBA標準曲線
檢出限(LOD)0.5 ng/mL(MRM147.15/117.10),定量限(LOQ)1.0 ng/mL (MRM147.15/117.10)

2.3 精密度實驗:10 ng/mL標準溶液為樣本連續進樣,日內及日間保留時間相對標準偏差低于0.1%,峰面積低于1.10%。

2.4 加標回收實驗

取0.1 g氯沙坦鉀樣品于10 mL容量瓶中,加入NMBA標準品溶液(相當于50、100、200 ng NMBA標準品),按照1.4中的方法進行處理,上機分析。加標的氯沙坦鉀溶液色譜圖(以200 ng加標量為例)見圖3。三個平行樣品的低中高平均回收率分別為98.04%,94.40%,95.61%。


圖3 NMBA加標量為200 ng時氯沙坦鉀溶液色譜圖

2.5 檢測結果:三批樣品中NMBA均低于最小檢出限(LOD)。

3、 結論

  本工作建立了使用LCMS-8050三重四極桿質譜聯用儀測定氯沙坦鉀原料藥中N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸(NMBA)雜質的方法,在0.5~100 ng/mL濃度范圍內線性關系良好,檢出限和定量限分別為0.5 ng/mL和1.0 ng/mL。使用此方法對三批次氯沙坦鉀原料藥進行了測定,結果為NMBA未檢出。本方法簡單、快速、靈敏、準確,可有效用于氯沙坦鉀原料藥中NMBA的分析檢測。

3d全部独胆三地村胆码